紫外可見(jiàn)分光光度計UV-VIS的工作原理：

　　分子的紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。

　　分光光度分析就是根據物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息?？梢杂脴藴使鈭D譜再結合其它手段進(jìn)行定性分析。

　　根據Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比；如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進(jìn)行定量分析。

　　將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見(jiàn)吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應*一致。如果沒(méi)有標樣，也可以和現成的標準譜圖對照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。

　　實(shí)驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。